Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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EDG-5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420642
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- EDG-5 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico EDG-5, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:EDG-5 Anticorpo (E-12): sc-365963
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
EDG-5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420642 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
S1pr2 codifica o EDG-5 (receptor 2 de esfingosina-1-fosfato), um GPCR que se liga ao lípido bioativo esfingosina-1-fosfato para regular a migração celular, a remodelação do citoesqueleto e as propriedades da barreira vascular. O EDG-5 sinaliza através de proteínas G heterotriméricas para ativar nós das vias RhoA/ROCK, MAPK/ERK e PI3K-AKT, moldando a dinâmica de adesão, sinais de proliferação e respostas inflamatórias. Em modelos murinos, a atividade de S1pr2 tem sido associada ao tráfego de células endoteliais e imunitárias, à remodelação ligada à fibrose e ao controlo dependente do contexto da invasão de células tumorais e do comportamento metastático. Assim, a sinalização S1P–S1PR2 desregulada é relevante para estudos de inflamação, disfunção vascular e respostas a lesão tecidular.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO EDG-5 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene S1pr2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do S1pr2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do S1pr2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína EDG-5.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de S1pr2 para a investigação da sinalização de EDG-5, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) S1pr2 críticos para a função EDG-5
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos S1pr2 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo EDG-5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo EDG-5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus S1pr2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo EDG-5 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR EDG-5 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia S1pr2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo S1pr2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.