Plasmide CRISPR/Cas9 KO EDG-5 (m): sc-420642

Présentation

S1pr2 code pour EDG-5 (récepteur 2 de la sphingosine-1-phosphate, S1PR2), un RCPG qui se lie au lipide bioactif sphingosine-1-phosphate afin de réguler la migration cellulaire, le remodelage du cytosquelette et les propriétés de la barrière vasculaire. EDG-5 transmet le signal via des protéines G hétérotrimériques pour activer des nœuds des voies RhoA/ROCK, MAPK/ERK et PI3K-AKT, modulant ainsi la dynamique d’adhésion, les signaux de prolifération et les réponses inflammatoires. Dans les systèmes murins, l’activité de S1pr2 a été associée au trafic des cellules endothéliales et immunitaires, au remodelage lié à la fibrose, ainsi qu’à un contrôle dépendant du contexte de l’invasion des cellules tumorales et du comportement métastatique. Une signalisation S1P–S1PR2 dérégulée est donc pertinente pour l’étude de l’inflammation, des dysfonctionnements vasculaires et des réponses aux lésions tissulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EDG-5 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène S1pr2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du S1pr2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert S1pr2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EDG-5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en S1pr2 pour l'étude de la signalisation de EDG-5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de S1pr2 essentiels à la fonction de EDG-5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de S1pr2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EDG-5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le EDG-5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus S1pr2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EDG-5 plasmide HDR (m) et le EDG-5 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie S1pr2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles S1pr2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.