EDG-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401366

Descripción general

S1PR3 (EDG-3) codifica un receptor acoplado a proteína G para la esfingosina-1-fosfato que se acopla a Gαi, Gαq y Gα12/13 para regular la movilización de calcio, la señalización MAPK/ERK, la activación de GTPasas de la familia Rho y la remodelación del citoesqueleto. A través de estas vías, EDG-3 influye en la función de barrera endotelial, el tono vascular, el tráfico de leucocitos y la migración celular, integrando señales lipídicas extracelulares con programas de señalización de adhesión e inflamación. La actividad alterada de S1PR3 se ha asociado con inflamación desregulada y remodelación vascular, y se estudia con frecuencia en contextos que incluyen la aterosclerosis, la fibrosis y las interacciones entre tumores y el microambiente. Estas características hacen de S1PR3 una diana útil para desentrañar las redes de señalización de los esfingolípidos en la biología inmunitaria y vascular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO EDG-3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen S1PR3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del S1PR3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de S1PR3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína EDG-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en S1PR3 para la investigación de la señalización de EDG-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de S1PR3 críticos para la función de EDG-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de S1PR3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido EDG-3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido EDG-3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus S1PR3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR EDG-3 (h) y el plásmido HDR EDG-3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología S1PR3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana S1PR3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.