ECHS1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406053

Panoramica

ECHS1 codifica l’enoyl-CoA idratasi 1 a catena corta, un enzima della matrice mitocondriale coinvolto nella spirale della β-ossidazione degli acidi grassi che catalizza l’idratazione degli intermedi trans-2-enoyl-CoA a catena corta. Attraverso il suo ruolo nel metabolismo energetico, ECHS1 sostiene la produzione mitocondriale di acetil-CoA e interagisce con vie che mantengono l’equilibrio redox e la fosforilazione ossidativa in condizioni di stress nutrizionale. L’alterazione della funzione di ECHS1 compromette l’utilizzo dei substrati da parte dei mitocondri ed è associata a errori congeniti del metabolismo caratterizzati da acidosi lattica e fenotipi neurodegenerativi. Nei modelli cellulari, ECHS1 viene comunemente studiato per il suo impatto sulla bioenergetica mitocondriale, sul flusso dei metaboliti e sulla segnalazione responsiva allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ECHS1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ECHS1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ECHS1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ECHS1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ECHS1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ECHS1 per lo studio della segnalazione di ECHS1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ECHS1 critici per la funzione di ECHS1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ECHS1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ECHS1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ECHS1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ECHS1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ECHS1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ECHS1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ECHS1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ECHS1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.