ECHS1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406053

Übersicht

ECHS1 kodiert die kurzkettige Enoyl‑CoA‑Hydratase 1, ein Enzym der mitochondrialen Matrix in der β‑Oxidationsspirale der Fettsäuren, das die Hydratisierung kurzkettiger trans‑2‑Enoyl‑CoA‑Zwischenprodukte katalysiert. Über seine Rolle im Energiestoffwechsel unterstützt ECHS1 die mitochondriale Acetyl‑CoA‑Produktion und steht in Verbindung mit Signalwegen, die unter Nährstoffstress das Redoxgleichgewicht und die oxidative Phosphorylierung aufrechterhalten. Eine Störung der ECHS1‑Funktion beeinträchtigt die mitochondriale Substratverwertung und ist mit angeborenen Stoffwechselstörungen assoziiert, die sich u. a. durch Laktatazidose und neurodegenerative Phänotypen auszeichnen. In Zellmodellen wird ECHS1 häufig hinsichtlich seiner Auswirkungen auf die mitochondriale Bioenergetik, den Metabolitenfluss und stressresponsive Signalwege untersucht.

Das ECHS1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ECHS1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ECHS1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ECHS1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ECHS1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ECHS1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ECHS1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ECHS1-Exone abzielen, die für die ECHS1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ECHS1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ECHS1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ECHS1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ECHS1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ECHS1 HDR-Plasmid (h) und ECHS1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ECHS1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ECHS1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.