Ebi2 Plasmide Double Nickase (h): sc-405397-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Ebi2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Ebi2 Double Nickase Plasmid (h) e il Ebi2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GPR183. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Ebi2 Antibody (G-12): sc-514342
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Ebi2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405397-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Ebi2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405397-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR183 codifica EBI2 (nota anche come GPR183), un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) che rileva ossisteroli come il 7α,25-di-idrossicolesterolo per guidare il posizionamento delle cellule immunitarie. La segnalazione di EBI2 coordina le risposte chemiotattiche e contribuisce all’organizzazione dei tessuti linfoidi modulando la localizzazione di cellule B e cellule dendritiche all’interno dei follicoli e delle regioni interfollicolari. Attraverso vie mediate da GPCR, incluse quelle dipendenti da Gαi, influenza la migrazione, gli stati di attivazione e le interazioni guidate dall’antigene che sono centrali per l’immunità umorale. Un’attività disregolata di GPR183 è stata implicata in contesti infiammatori e autoimmuni ed è stata studiata anche nel rimodellamento immunitario associato alle infezioni, rendendolo un nodo utile per investigare il traffico delle cellule immunitarie e la biologia degli ossisteroli.
Ebi2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GPR183 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GPR183. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GPR183. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GPR183 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.