EBF3 Double Nickase Plasmid (h): sc-402181-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das EBF3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- EBF3 Double-Nickase-Plasmid (h) und EBF3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EBF3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: EBF3: sc-81999
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
EBF3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402181-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EBF3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402181-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EBF3 kodiert einen Transkriptionsfaktor der Early-B-Cell-Factor-Familie, der über ein konserviertes Helix-Loop-Helix-Motiv an DNA bindet und dadurch Genprogramme reguliert, die neuronale Differenzierung, Zellzyklusfortschritt und Linienfestlegung steuern. In menschlichen Zellen ist EBF3 in transkriptionelle Netzwerke eingebunden, die die Chromatinzugänglichkeit prägen und das Entwicklungstiming in neuralen und mesenchymalen Kontexten koordinieren. Störungen von EBF3 wurden mit neuroentwicklungsbezogenen Erkrankungen in Verbindung gebracht, einschließlich syndromaler Erscheinungsbilder mit intellektueller Beeinträchtigung und Ataxie, was mit seiner Rolle in der neuronalen Reifung und Schaltkreisbildung übereinstimmt. Da EBF3 weitreichende transkriptionelle Kaskaden beeinflusst, wird es häufig in Modellen zur Regulation entwicklungsbezogener Genexpression, zur zellulären Identität und zur stressresponsiven Transkription untersucht.
EBF3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EBF3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EBF3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EBF3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EBF3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.