EBF3 Plasmide Double Nickase (h): sc-402181-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EBF3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EBF3 Double Nickase Plasmid (h) e il EBF3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EBF3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EBF3 Antibody (N7Q): sc-81999
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EBF3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402181-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EBF3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402181-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EBF3 codifica un fattore di trascrizione della famiglia “early B-cell factor” che si lega al DNA tramite un motivo elica–ansa–elica conservato, regolando programmi genici che controllano la differenziazione neuronale, la progressione del ciclo cellulare e la specificazione di linea. Nelle cellule umane, EBF3 si integra in reti trascrizionali che modellano l’accessibilità della cromatina e coordinano i tempi dello sviluppo in contesti neurali e mesenchimali. Alterazioni di EBF3 sono state associate a disturbi del neurosviluppo, incluse presentazioni sindromiche con disabilità intellettiva e atassia, in linea con il suo ruolo nella maturazione neuronale e nella formazione dei circuiti. Poiché EBF3 influenza ampie cascate trascrizionali, è spesso studiato in modelli di regolazione genica dello sviluppo, identità cellulare e trascrizione responsiva allo stress.
EBF3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EBF3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EBF3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EBF3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EBF3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.