Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
EAAT2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422984
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- EAAT2 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico EAAT2, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:EAAT2 Anticorpo (E-1): sc-365634
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
EAAT2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422984 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Slc1a2 codifica o transportador de aminoácidos excitatórios 2 (EAAT2), um transportador de glutamato dependente de Na+ e de alta capacidade, expresso predominantemente em astrócitos, que remove o glutamato sináptico para manter a neurotransmissão excitatória e prevenir estresse excitotóxico. O EAAT2 molda a sinalização glutamatérgica ao acoplar a captação de glutamato a gradientes iônicos e ao sustentar o acoplamento metabólico astrócito–neurônio por meio do ciclo glutamato–glutamina. Por meio da regulação da homeostase do glutamato extracelular, o Slc1a2 influencia a plasticidade sináptica, a sobrevivência neuronal e a excitabilidade das redes neurais. Alterações na função ou na expressão do EAAT2 têm sido associadas a mecanismos relevantes para neurodegeneração, epilepsia e neuroinflamação, tornando o Slc1a2 um alvo comum em estudos de vias do SNC.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO EAAT2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Slc1a2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Slc1a2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Slc1a2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína EAAT2.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Slc1a2 para a investigação da sinalização de EAAT2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Slc1a2 críticos para a função EAAT2
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Slc1a2 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo EAAT2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo EAAT2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Slc1a2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo EAAT2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR EAAT2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Slc1a2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Slc1a2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.