EAAT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422984

Übersicht

Slc1a2 kodiert den exzitatorischen Aminosäuretransporter 2 (EAAT2), einen hochkapazitativen, Na+-abhängigen Glutamattransporter, der überwiegend in Astrozyten exprimiert wird und synaptisches Glutamat entfernt, um die exzitatorische Neurotransmission aufrechtzuerhalten und excitotoxischen Stress zu verhindern. EAAT2 prägt die glutamaterge Signalübertragung, indem er die Glutamataufnahme an Ionengradienten koppelt und über den Glutamat-Glutamin-Zyklus die metabolische Kopplung zwischen Astrozyten und Neuronen unterstützt. Durch die Regulation der extrazellulären Glutamathomöostase beeinflusst Slc1a2 synaptische Plastizität, neuronales Überleben und die Erregbarkeit neuronaler Netzwerke. Eine veränderte EAAT2-Funktion oder -Expression wurde mit Mechanismen in Verbindung gebracht, die für Neurodegeneration, Epilepsie und Neuroinflammation relevant sind, weshalb Slc1a2 in Studien zu ZNS-Signalwegen häufig als Zielgen dient.

Das EAAT2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Slc1a2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Slc1a2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Slc1a2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die EAAT2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Slc1a2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der EAAT2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Slc1a2-Exone abzielen, die für die EAAT2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Slc1a2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom EAAT2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom EAAT2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Slc1a2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das EAAT2 HDR-Plasmid (m) und EAAT2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Slc1a2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Slc1a2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.