E6BP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409673-ACT

RCN2は、分泌経路の恒常性に関与するとされる、小胞体（ER）常在のカルシウム結合タンパク質であるヒトE6結合タンパク質（E6BP）をコードしています。E6BPは、ERルーメン内におけるカルシウム依存的なタンパク質フォールディングと品質管理に寄与し、ERストレスシグナル伝達やプロテオスタシス関連プロセスとの関連が示唆されています。これらの機能を通じてRCN2は、輸送・分泌ならびにストレス適応的な転写プログラムを調節する細胞応答に関係します。ERのプロテオスタシス異常やカルシウム制御の破綻は、疾患に関連する表現型としばしば結び付けられるため、RCN2はストレスシグナル伝達や分泌生物学の機構研究における有用な標的となります。

E6BP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RCN2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

E6BP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RCN2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRCN2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性E6BPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRCN2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるE6BP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRCN2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるE6BP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。