E2F-8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406972

Übersicht

E2F8 kodiert E2F-8, ein atypisches Mitglied der E2F-Transkriptionsfaktorfamilie, das überwiegend als transkriptioneller Repressor fungiert und so das Fortschreiten des Zellzyklus sowie das Timing der DNA-Replikation steuert. E2F-8 ist an RB/E2F-regulierten Netzwerken beteiligt, koordiniert die Genexpression der S-Phase und trägt über die Regulation proliferativer Programme zur Aufrechterhaltung der Genomstabilität bei. Es spielt eine Rolle bei der entwicklungsabhängigen Wachstumskontrolle und bei Entscheidungen über das Zellschicksal; eine veränderte E2F8-Expression wurde zudem mit der fehlregulierten Proliferation in unterschiedlichen Krebszusammenhängen in Verbindung gebracht. Da E2F-8 Schnittstellen zu zentralen Checkpoint- und replikationsassoziierten Signalwegen hat, eignet es sich als wichtiger Knotenpunkt, um die transkriptionelle Kontrolle des Eintritts in den Zellzyklus und die Antwort auf Replikationsstress zu untersuchen.

Das E2F-8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des E2F8-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des E2F8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von E2F8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die E2F-8-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von E2F8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der E2F-8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf E2F8-Exone abzielen, die für die E2F-8-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere E2F8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom E2F-8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom E2F-8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des E2F8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das E2F-8 HDR-Plasmid (h) und E2F-8 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von E2F8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten E2F8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.