Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
E-cadherin Double Nickase Plasmid (h): sc-400031-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das E-cadherin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- E-cadherin Double-Nickase-Plasmid (h) und E-cadherin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CDH1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: E-cadherin: sc-8426
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
E-cadherin Double Nickase Plasmid (h) | sc-400031-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
E-cadherin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400031-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDH1 kodiert E‑Cadherin, ein Ca2+-abhängiges Adherens-Junction-Protein, das homophile Zell‑Zell‑Adhäsion vermittelt und die epitheliale Polarität sowie die Gewebearchitektur aufrechterhält. Über die Kopplung an β‑Catenin, p120‑Catenin und das Aktinzytoskelett koordiniert E‑Cadherin den Umbau von Zellkontakten, Kontaktinhibition und Mechanotransduktion und moduliert indirekt die Wnt/β‑Catenin-Signalgebung, indem es die Verfügbarkeit von β‑Catenin beeinflusst. Eine Störung von CDH1 beeinträchtigt die Integrität der epithelialen Barriere und fördert zelluläre Dedifferenzierungsprogramme wie die epithelial‑mesenchymale Transition (EMT) – Prozesse, die häufig im Zusammenhang mit Invasion, metastaseassoziierten Phänotypen und veränderter Gewebemorphogenese untersucht werden. Verlust oder Funktionsstörung von CDH1 tritt wiederholt in epithelialen Tumoren auf und ist außerdem an hereditärem diffusem Magenkrebs beteiligt, was CDH1 zu einem zentralen Lokus für die Untersuchung adhäsionsabhängiger Signalwege und der epithelialen Homöostase in Humanmodellen macht.
E-cadherin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CDH1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CDH1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CDH1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CDH1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.