E-cadherin CRISPR Activation Plasmid (m): sc-419587-ACT

Cdh1 kodiert E-Cadherin, einen Ca2+-abhängigen Zell-Zell-Adhäsionsrezeptor, der Adherens Junctions durch homophile Bindung sowie über Catenine durch die Verknüpfung mit dem Aktin-Zytoskelett organisiert. Dieser Komplex ist zentral für die epitheliale Polarität, die Gewebearchitektur und die Kontaktinhibition und moduliert Signalnetzwerke wie Wnt/β-Catenin, Hippo/YAP-TAZ und Wachstumsfaktorrezeptor-Signalwege, die Differenzierung und Proliferation koordinieren. In Mausmodellen stört eine veränderte E-Cadherin-Expression die Integrität der epithelialen Barriere und die Morphogenese und wird in Studien zu Invasion und metastatischer Kompetenz häufig als molekularer Readout der epithelial-mesenchymalen Plastizität verwendet. Eine Fehlregulation der CDH1/E-Cadherin-Funktion ist häufig mit Tumorprogression, entzündlicher Barrierefunktionsstörung und Entwicklungsdefekten assoziiert, was ihre Bedeutung für die mechanistische Krankheitsforschung unterstreicht.

E-cadherin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Cdh1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

E-cadherin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Cdh1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Cdh1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen E-cadherin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Cdh1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von E-cadherin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des E-cadherin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Cdh1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.