dystrophin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (porcine): sc-437292

Übersicht

Dystrophin ist ein großes zytoskelettales Protein, das das intrazelluläre Aktin-Netzwerk mit dem dystrophin-assoziierten Glykoproteinkomplex am Sarkolemm verbindet und dadurch Muskelfasern während der Kontraktion stabilisiert. Es unterstützt die Membranintegrität und die Mechanotransduktion in der Skelett- und Herzmuskulatur und beeinflusst Signalprozesse, die den Calciumhaushalt, die Stickstoffmonoxid(NO)-Signalgebung und zelluläre Stressantworten koordinieren. Eine Störung von Dystrophin beeinträchtigt die Widerstandsfähigkeit des Sarkolemms, was zu Muskelfaserschäden, Entzündungen und einem fortschreitenden Umbau führt und häufig als molekularer Ansatzpunkt für die Untersuchung von Mechanismen der Muskeldystrophie dient. In porcinen Systemen wird die Dystrophin-Biologie genutzt, um Muskelentwicklung, -architektur und krankheitsrelevante Signalwege im Kontext eines Großtiermodells zu untersuchen.

Das dystrophin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (porcine) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des -Gens in porcine-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des -Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die dystrophin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von -defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der dystrophin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf -Exone abzielen, die für die dystrophin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere -Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom dystrophin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (porcine) und vom dystrophin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (porcine2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des -Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das dystrophin HDR-Plasmid (porcine) und dystrophin HDR-Plasmid (porcine2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von -Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten -Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.