Plásmido Doble Nickase (h) Dynein HC: sc-400919-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Dynein HC consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Dynein HC (h) y el plásmido de doble nickasa Dynein HC (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a DYNC1H1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Dynein HC Anticuerpo (C-5): sc-514579
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Dynein HC | sc-400919-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Dynein HC | sc-400919-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DYNC1H1 codifica la cadena pesada 1 de la dineína citoplasmática, una ATPasa motora central que impulsa el transporte dirigido hacia el extremo menos a lo largo de los microtúbulos. La cadena pesada de la dineína coordina el tráfico intracelular de cargas, el posicionamiento de orgánulos, el ensamblaje del huso mitótico y el transporte axonal retrógrado mediante interacciones con la dinactina y adaptadores de carga, integrándose con la dinámica de los microtúbulos y las vías de control del ciclo celular. La alteración del transporte dependiente de la dineína se ha vinculado con fenotipos del neurodesarrollo y neuromusculares, lo que refleja el papel esencial de la proteína en la polaridad neuronal y el movimiento de vesículas a larga distancia. En consecuencia, DYNC1H1 se estudia ampliamente en la regulación del citoesqueleto, la homeostasis neuronal y los mecanismos de la logística intracelular.
Dynein HC El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DYNC1H1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DYNC1H1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DYNC1H1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DYNC1H1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.