Plasmide Double Nickase (h) Dynamin II: sc-401037-NIC

DNM2 code la dynamine II, une grande GTPase qui catalyse la scission des membranes lors de l’endocytose médiée par la clathrine et d’autres événements de trafic vésiculaire. Grâce à des interactions avec les phosphoinositides et des protéines à domaine SH3, la dynamine II coordonne l’internalisation des récepteurs, le recyclage des vésicules synaptiques et la dynamique des endosomes, reliant le remodelage membranaire à l’organisation du cytosquelette d’actine. L’activité de DNM2 influence les voies de signalisation en contrôlant le trafic et le renouvellement des récepteurs de surface, avec des effets en aval sur la prolifération, la migration et l’homéostasie cellulaires. Des variants et une dérégulation de DNM2 sont associés à des phénotypes neuromusculaires et neurodégénératifs et sont largement étudiés dans le contexte de défauts de trafic membranaire et d’anomalies du cytosquelette.

Dynamin II Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DNM2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DNM2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DNM2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DNM2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.