Dynactin 5 Double Nickase Plasmid (m): sc-425606-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Dynactin 5 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Dynactin 5 Double-Nickase-Plasmid (m) und Dynactin 5 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Dctn5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Dynactin 5: sc-518204
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Dynactin 5 Double Nickase Plasmid (m) | sc-425606-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Dynactin 5 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-425606-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Dctn5 kodiert Dynactin 5, eine Untereinheit des Dynactin-Komplexes, der mit dem zytoplasmatischen Dynein zusammenwirkt, um mikrotubuli-basierten retrograden Transport zu ermöglichen. Durch die Regulation der Bindung von Frachtadaptern und der prozessiven Motoraktivität trägt Dynactin 5 zum Transport von Vesikeln und Organellen, zur Endosom–Lysosom-Dynamik sowie zur Positionierung des Golgi-Apparats und der mitotischen Spindel bei. Diese Funktionen verorten Dctn5 in Signal- und Funktionswegen, die den intrazellulären Transport, die Zellteilung sowie die Homöostase von Nervenzellen und Immunzellen steuern, in denen Langstreckentransport geschwindigkeitsbestimmend ist. Störungen von Dynein–Dynactin-Komponenten sind für Studien zu Neurodegeneration, Entwicklungsdefekten und Stressantworten breit relevant, da sie mit beeinträchtigtem axonalem Transport und gestörter Proteostase in Verbindung stehen.
Dynactin 5 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Dctn5-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Dctn5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Dctn5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Dctn5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.