Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400785-ACT

Das humane Gen **DVL1** kodiert **Dishevelled 1 (Dvl-1)**, ein zytoplasmatisches Scaffold-Protein, das Signale von **Frizzled/LRP**-Rezeptoren an nachgeschaltete **Wnt**-Signalwege weiterleitet. Dvl-1 koordiniert das kanonische **Wnt/β‑Catenin**-Signal durch Regulation des **β‑Catenin-Abbaukomplexes** und ist zudem an nicht-kanonischer **planarer Zellpolarität (PCP)** sowie **Wnt/Ca²⁺**-Signalgebung beteiligt, die Polarität, Migration und die Organisation des Zytoskeletts formen. Über diese Signalwege beeinflusst **DVL1** Zellschicksalsentscheidungen, Gewebemusterung und stammzellähnliche Phänotypen; eine fehlregulierte **Wnt–DVL**-Signalübertragung ist häufig in onkogenen Transkriptionsprogrammen und Entwicklungsstörungen involviert. Veränderungen der Signalwegaktivität werden oft in Kontexten wie **epithelial-mesenchymaler Transition (EMT)**, Invasion und aberranter Differenzierung untersucht.

Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DVL1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DVL1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DVL1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DVL1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DVL1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.