Plasmide Double Nickase (h) dUTPase: sc-405843-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) dUTPase correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide dUTPase Double Nickase (h) et le plasmide dUTPase Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DUT. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: dUTPase Antibody (H-9): sc-166856
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) dUTPase | sc-405843-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) dUTPase | sc-405843-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DUT code la dUTPase humaine, une enzyme du métabolisme des nucléotides qui hydrolyse le dUTP en dUMP, réduisant ainsi les réserves intracellulaires de dUTP et fournissant un substrat pour la biosynthèse du thymidylate. En empêchant l’incorporation erronée d’uracile dans l’ADN, la dUTPase soutient l’intégrité du génome lors de la réplication et de la réparation de l’ADN et contribue à limiter les cycles de réparation par excision de base déclenchés par les uracil-ADN glycosylases. L’activité de DUT s’intègre au métabolisme monocarboné dépendant des folates et à l’homéostasie des pyrimidines, reliant l’équilibre des nucléotides aux réponses au stress de réplication. Un métabolisme du dUTP dérégulé et l’accumulation d’uracile sont associés à une augmentation de la signalisation des dommages à l’ADN et ont été étudiés dans des contextes d’instabilité génomique et de biologie tumorale.
dUTPase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DUT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DUT. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DUT. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DUT.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.