dUTPase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405843

Descripción general

DUT codifica la dUTPasa humana, una enzima clave del metabolismo de nucleótidos que hidroliza dUTP a dUMP y pirofosfato, manteniendo así bajos los niveles intracelulares de dUTP y aportando sustrato para la biosíntesis de timidilato. Al limitar la incorporación de uracilo en el ADN genómico, la dUTPasa favorece la fidelidad de la replicación y la estabilidad del genoma, y se relaciona funcionalmente con las vías de reparación por escisión de bases que eliminan el uracilo del ADN. La actividad alterada de DUT puede modular las respuestas al estrés replicativo y la señalización del daño en el ADN, procesos que a menudo se ven perturbados en trastornos proliferativos y en células sometidas a estrés genotóxico. Como nodo central de la homeostasis de pirimidinas, DUT se estudia ampliamente en el contexto de la progresión del ciclo celular, el mantenimiento del ADN mitocondrial y nuclear, y la mutagénesis impulsada por desequilibrios de nucleótidos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO dUTPase (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DUT en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DUT junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DUT tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína dUTPase.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DUT para la investigación de la señalización de dUTPase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DUT críticos para la función de dUTPase
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DUT para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido dUTPase CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido dUTPase CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DUT. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR dUTPase (h) y el plásmido HDR dUTPase (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DUT para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DUT definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.