Particules Lentivirales d'Activation (m) DUSP22: sc-430587-LAC

Le gène murin *Dusp22* code la phosphatase à double spécificité 22 (DUSP22), une phosphatase atypique des MAPK qui déphosphoryle des résidus sérine/thréonine et tyrosine afin d’ajuster la dynamique de la signalisation intracellulaire. DUSP22 a été impliquée dans la régulation des voies MAPK activées par le stress, notamment les voies JNK et p38, influençant ainsi des programmes transcriptionnels liés à l’activation des cellules immunitaires, à la signalisation des cytokines et à l’apoptose. En modulant la propagation des signaux dépendante de la phosphorylation, DUSP22 affecte des processus tels que la signalisation proximale du récepteur des lymphocytes T, ainsi que des réponses inflammatoires plus larges. Une activité ou une expression dérégulée de DUSP22 est donc pertinente pour l’étude des pathologies à médiation immunitaire, du remaniement des réseaux de signalisation et du contrôle de la phosphorylation dans des modèles de maladie.

Les particules d'activation lentivirales DUSP22 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Dusp22 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales DUSP22 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Dusp22, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de DUSP22. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Dusp22 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.