DUOX1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-430265

Übersicht

Duox1 kodiert die Dualoxidase 1 (DUOX1), ein Enzym der NADPH-Oxidase-Familie, das Wasserstoffperoxid an der Zelloberfläche und innerhalb sekretorischer Transportwege erzeugt. In Epithelien und Schleimhautgeweben der Maus tragen von DUOX1 abgeleitete reaktive Sauerstoffspezies zur Redox-Signalgebung, zur angeborenen Wirtsabwehr und zur Regulation von Prozessen wie Wundheilung und Entzündungsreaktionen bei. Die DUOX1-Aktivität ist mit calciumabhängiger Signalübertragung verknüpft und beeinflusst nachgeschaltete, gegenüber oxidativen Signalen empfindliche Signalwege, darunter MAPK- und NF-κB-assoziierte Transkriptionsprogramme. Eine fehlregulierte DUOX1-vermittelte ROS-Produktion wurde in Modellen der Atemwegsentzündung, der Störung der epithelialen Barrierefunktion und der Biologie des oxidativen Stresses mit krankheitsrelevanten Mechanismen in Verbindung gebracht.

Das DUOX1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Duox1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Duox1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Duox1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DUOX1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Duox1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DUOX1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Duox1-Exone abzielen, die für die DUOX1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Duox1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DUOX1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom DUOX1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Duox1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DUOX1 HDR-Plasmid (m) und DUOX1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Duox1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Duox1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.