DTWD1 Double Nickase Plasmid (h): sc-416659-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DTWD1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DTWD1 Double-Nickase-Plasmid (h) und DTWD1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DTWD1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DTWD1: sc-398408
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DTWD1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-416659-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DTWD1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-416659-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DTWD1 kodiert ein konserviertes Protein mit einer DTW-Domäne, das mit dem RNA-Stoffwechsel in Verbindung gebracht wird; vorgeschlagen werden Funktionen bei tRNA- sowie allgemeineren RNA-Modifikationsprozessen, die die Translationsgenauigkeit und die Proteostase beeinflussen können. Obwohl DTWD1 noch nicht vollständig charakterisiert ist, sind Proteine mit DTW-Domäne häufig mit nukleotidmodifizierenden Aktivitäten und der Koordination von RNA-Verarbeitungswegen im Zytoplasma und Zellkern assoziiert. Störungen der RNA-Modifikation und der Translationskontrolle können den Zellzyklusverlauf und Stressantwort-Signalwege verändern, wodurch DTWD1 für Studien zur Regulation der Genexpression und zur zellulären Homöostase relevant ist. Veränderte DTWD1-Expression wurde in transkriptomischen Datensätzen in mehreren Krankheitskontexten berichtet, was seine Nutzung als Kandidatengen in mechanistischen Genomik-Untersuchungen unterstützt.
DTWD1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DTWD1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DTWD1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DTWD1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DTWD1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.