DSC2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403386-ACT

Das humane DSC2 kodiert Desmocollin-2, ein calciumabhängiges desmosomales Cadherin, das die Zell-Zell-Adhäsion vermittelt und zur Integrität der epithelialen Barriere sowie zur mechanischen Kopplung zwischen benachbarten Zellen beiträgt. DSC2 ist an Aufbau und Stabilisierung von Desmosomen beteiligt, indem es mit Plakoglobin, Plakophilinen und Desmoplakin interagiert, dadurch Junction-Komplexe mit Intermediärfilamenten verknüpft und die Gewebearchitektur während Differenzierung und Stress koordiniert. Eine veränderte DSC2-Expression oder ein desmosomales Remodeling wird mit gestörter Adhäsion, abweichender Signalweg-Kreuzregulation und Veränderungen der Zellmotilität in Verbindung gebracht, die für die Pathobiologie von Epithelien relevant sind. Da Desmosomen strukturelle und Signal-Funktionen integrieren, wird DSC2 häufig in Modellen zur Dynamik von Zellkontakten, zur Organisation des Zytoskeletts und zur Gewebehomöostase untersucht.

DSC2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DSC2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

DSC2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DSC2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DSC2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen DSC2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DSC2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von DSC2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des DSC2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DSC2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.