DSC1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402944-ACT

ヒトDSC1は、重層上皮のデスモソームに局在するカルシウム依存性カドヘリンファミリーの接着タンパク質であるデスモコリン1をコードします。DSC1は、デスモソーム型カドヘリン同士の相互作用を介して強固な細胞間結合を形成し、さらにプラコグロビン、プラコフィリン、デスモプラキンと結合して中間径フィラメントを固定することで、表皮バリアの完全性と組織の力学的特性の維持に寄与します。その発現はケラチノサイトの分化プログラムや上皮形態形成と密接に連動しており、DSC1の制御異常は、細胞間接着の低下、上皮異形成、腫瘍生物学といった文脈で研究されています。デスモソームのリモデリングは細胞骨格ダイナミクスやストレスシグナルとも関わるため、DSC1は上皮の結束性、分化、移動を制御する経路においてもしばしば解析対象となります。

DSC1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DSC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DSC1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DSC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDSC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DSC1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDSC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDSC1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDSC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDSC1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。