Plásmido CRISPR de Activación (h) DRIM: sc-409900-ACT

UTP20 codifica DRIM, un factor nucleolar de biogénesis ribosomal necesario para la maduración del ARNr 18S y el ensamblaje de la subunidad ribosomal pequeña. DRIM participa en el procesamiento del ARN preribosomal y en la organización nucleolar, vinculando la síntesis de ARNr con el control del crecimiento celular y la capacidad traduccional global. La desregulación de la biogénesis ribosomal y de las vías de estrés nucleolar se asocia ampliamente con fenotipos proliferativos y con una proteostasis alterada, lo que hace que UTP20/DRIM sea relevante para estudios de señalización de crecimiento, progresión del ciclo celular y programas transcripcionales adaptativos al estrés. Como componente central de la maquinaria fundamental de procesamiento de ARN, la alteración de DRIM ofrece un punto de entrada mecanístico para analizar firmas moleculares relacionadas con ribosomopatías en modelos celulares humanos.

DRIM El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de UTP20 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DRIM El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus UTP20 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional UTP20, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DRIM. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo UTP20 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DRIM en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DRIM en células tumorales con expresión de UTP20 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.