DR6 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402038-ACT

Humanes TNFRSF21 kodiert den Todesrezeptor 6 (DR6), ein Mitglied der TNF-Rezeptor-Superfamilie, das die neuronale Entwicklung, die Immun-Signalübertragung und die Apoptose über rezeptorvermittelte Signalwege moduliert. DR6 kann Adapterproteine rekrutieren, um die Caspase-Aktivierung zu beeinflussen, und greift in die NF-κB- und MAPK-Signalübertragung ein, wodurch zytokinabhängige Transkriptionsprogramme geprägt werden. Im neuronalen Kontext wurde DR6 mit Axon-Pruning und synaptischem Remodeling in Verbindung gebracht, während es in Immunzellen zur Regulation von Aktivierung und Zellüberleben beiträgt. Eine Fehlregulation der TNFRSF21/DR6-Signalgebung wurde mit inflammatorischen Phänotypen assoziiert und im Zusammenhang mit neurodegenerativen sowie onkologischen Mechanismen untersucht, was seine Eignung als Knotenpunkt in Signalwegen für funktionelle Studien unterstreicht.

DR6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TNFRSF21-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

DR6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TNFRSF21-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TNFRSF21-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen DR6-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TNFRSF21-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von DR6-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des DR6-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TNFRSF21-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.