DPYD Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403396-NIC

DPYD codifica a di-hidropirimidina desidrogenase, a enzima limitante da velocidade no catabolismo de pirimidinas que converte uracilo e timina em di-hidrouracilo e di-hidrotimina, conectando a renovação de nucleotídeos ao metabolismo celular de nitrogênio e carbono. Como uma importante oxidorredutase dependente de NADPH, a atividade de DPYD influencia a homeostase do pool de nucleotídeos e pode se cruzar com o equilíbrio redox e com as demandas bioenergéticas mitocondriais em células em proliferação. Variações genéticas ou alterações na expressão de DPYD estão associadas a erros inatos do metabolismo de pirimidinas e têm sido estudadas no contexto de diferenças interindividuais no metabolismo de fármacos fluoropirimidínicos e no risco de toxicidade. DPYD também serve como um nó útil para investigar a remodelação metabólica, respostas ao estresse causado por desequilíbrio de nucleotídeos e o crosstalk entre vias que afeta a síntese de RNA/DNA.

DPYD O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus DPYD em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de DPYD. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função DPYD. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com DPYD interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.