Dpl CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403482

Übersicht

PRND kodiert das humane Doppel-(Dpl)-Protein, ein über Glycosylphosphatidylinositol (GPI) verankertes membranständiges Glykoprotein der Prionprotein-Familie, das an der Zelloberfläche sowie in Kompartimenten des sekretorischen Wegs lokalisiert. Dpl wird mit neuronaler und reproduktiver Biologie in Verbindung gebracht; beschrieben wurden Funktionen bei Zell-Zell-Interaktionen, Reaktionen auf oxidativen Stress und der Regulation von Überlebenssignalen, die in Signalwege eingreifen, welche die Mitochondrienfunktion und die Redox-Homöostase beeinflussen. Eine aberrante PRND/Dpl-Expression wurde in mehreren malignen Erkrankungen beobachtet und als Marker für veränderte Differenzierung und Invasivität untersucht, was die Erforschung seines Beitrags zu Tumorzell-Phänotypen unterstützt. Im Kontext des Nervensystems sind Proteine der Prion-Familie für Prozesse der Proteinhomöostase und neurodegenerationsassoziierte Mechanismen relevant, sodass PRND einen nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien zu membranassoziierter Signalübertragung und Stressadaptation darstellt.

Das Dpl CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PRND-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PRND-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PRND nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Dpl-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PRND-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Dpl-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PRND-Exone abzielen, die für die Dpl-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PRND-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Dpl CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Dpl CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PRND-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Dpl HDR-Plasmid (h) und Dpl HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PRND-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PRND-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.