Doublecortin/DCX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400033

Übersicht

DCX kodiert Doublecortin, ein mikrotubuliassoziiertes Protein, das an polymerisierte Mikrotubuli bindet und sie stabilisiert, um während der Neuroentwicklung die neuronale Migration, das Neuritenauswachsen und die Ausbildung kortikaler Schichten zu koordinieren. Doublecortin wirkt in Programmen des Zytoskelett-Remodelings, die Mikrotubuli-Dynamik mit der Positionierung des Zentrosoms und der Führung des Wachstumskegels verknüpfen, und beeinflusst so die Polarisierung und Axonverlängerung in sich entwickelnden Neuronen. Pathogene Varianten oder eine Fehlregulation von DCX sind mit neuroentwicklungsbedingten Störungen verbunden, die durch eine gestörte kortikale Organisation gekennzeichnet sind, darunter die X‑chromosomal vererbte Lissenzephalie und die subkortikale Bandheterotopie. Als zellbiologischer Marker für migrierende Neuroblasten und unreife Neuronen wird DCX широко eingesetzt, um Entwicklungsverläufe und Mechanismen zu untersuchen, die die neuronale Positionierung steuern.

Das Doublecortin/DCX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DCX-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DCX-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DCX nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Doublecortin/DCX-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DCX-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Doublecortin/DCX-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DCX-Exone abzielen, die für die Doublecortin/DCX-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DCX-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Doublecortin/DCX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Doublecortin/DCX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DCX-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Doublecortin/DCX HDR-Plasmid (h) und Doublecortin/DCX HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DCX-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DCX-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.