Doublecortin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r): sc-437358

Übersicht

Doublecortin (DCX) ist ein neuronales, mikrotubuliassoziiertes Protein, das an Mikrotubuli bindet und sie stabilisiert, um während der Neurogenese die Zytoskelettdynamik zu regulieren. Es wird stark in wandernden Neuroblasten und unreifen Neuronen exprimiert, wo es das Neuritenwachstum, die neuronale Polarisierung und die kortikale Schichtung unterstützt, indem es die Mikrotubuli-Polymerisation und den intrazellulären Transport steuert. DCX ist in Signalwege eingebunden, die die Koordination von Aktin und Mikrotubuli, die Positionierung des Zentrosoms und die Axonführung regulieren, und verknüpft so Zytoskelett-Umbauprozesse mit Entwicklungs- und Musterbildungsprozessen. Eine Störung der DCX-Funktion ist mit neuroentwicklungsbedingten Auffälligkeiten und veränderter neuronaler Konnektivität assoziiert, weshalb DCX in Studien zur neuronalen Migration und Gehirnentwicklung häufig als Marker und als mechanistischer Knotenpunkt verwendet wird.

Das Doublecortin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (r) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des -Gens in rat-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des -Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Doublecortin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von -defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Doublecortin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf -Exone abzielen, die für die Doublecortin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere -Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Doublecortin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (r) und vom Doublecortin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (r2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des -Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Doublecortin HDR-Plasmid (r) und Doublecortin HDR-Plasmid (r2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von -Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten -Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.