Plasmide CRISPR/Cas9 KO Dorfin (h): sc-406860

Présentation

RNF19A code la Dorfin, une ligase E3 ubiquitine de la famille RBR impliquée dans le contrôle qualité des protéines dépendant de l’ubiquitine et dans la protéostasie. Dorfin participe à la reconnaissance et à l’ubiquitinylation de substrats mal repliés ou sujets à l’agrégation, reliant les réponses au stress du réticulum endoplasmique et les voies de dégradation cytosoliques afin de maintenir l’homéostasie cellulaire. En régulant la signalisation de l’ubiquitine et le renouvellement de protéines neuronales et associées au stress, RNF19A a été étudié dans le contexte des maladies neurodégénératives et d’autres affections caractérisées par l’agrégation protéique et une protéostasie dérégulée. Son activité recoupe des voies gouvernant la dégradation associée au réticulum endoplasmique (ERAD), l’élimination liée à l’autophagie et des réseaux de signalisation induits par le stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Dorfin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RNF19A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RNF19A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RNF19A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Dorfin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RNF19A pour l'étude de la signalisation de Dorfin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RNF19A essentiels à la fonction de Dorfin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RNF19A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Dorfin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Dorfin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RNF19A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Dorfin plasmide HDR (h) et le Dorfin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RNF19A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RNF19A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.