DOR-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402195-ACT

OPRD1 kodiert den humanen Delta-Opioidrezeptor (DOR-1), einen GPCR der Klasse A, der vorwiegend an Gi/Go-Proteine koppelt und dadurch die Aktivität der Adenylylcyclase, die Leitfähigkeit von Ionenkanälen und die MAPK-Signalübertragung reguliert. DOR-1 moduliert die synaptische Transmission und die neuroimmune Kommunikation über nachgeschaltete Signalwege wie cAMP/PKA und ERK1/2 und beeinflusst damit die neuronale Erregbarkeit sowie die Freisetzung von Neurotransmittern. Die Rezeptoraktivierung wirkt sich auf Prozesse wie nozizeptive Signalübertragung, Stressreaktivität und belohnungsbezogene neuronale Schaltkreise aus; eine veränderte OPRD1-Expression oder -Signalübertragung wurde in biomedizinischen Forschungskontexten mit neuropsychiatrischen und schmerzbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen OPRD1 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um die Dynamik der GPCR-Signalübertragung, Rezeptor-Trafficking/Desensitivierung und Signalweg-Bias in humanen Zellmodellen zu untersuchen.

DOR-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen OPRD1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

DOR-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des OPRD1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der OPRD1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen DOR-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native OPRD1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von DOR-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des DOR-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem OPRD1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.