DOCK 7 Lentiviral Activation Particles (m): sc-426491-LAC

Dock7 kodiert DOCK7, einen atypischen Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor, der Rac1 und Cdc42 aktiviert, um den Umbau des Aktin-Zytoskeletts, die Zellpolarität und die gerichtete Migration zu koordinieren. In Mauszellen unterstützt DOCK7 das Neuritenauswachsen und die neuronale Differenzierung und trägt über Rho-GTPase-abhängige Signalwege zur Funktion von Schwann-Zellen und zur Myelinisierung bei. Durch die Kopplung extrazellulärer Signale an die Zytoskelettdynamik beeinflusst DOCK7 Prozesse wie Axonführung, Membrantransport und Morphogenese. Eine fehlregulierte DOCK7-Aktivität wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und aberranten Programmen der Zellmotilität in Verbindung gebracht, was für mechanistische Studien der Entwicklung des Nervensystems und krankheitsassoziierter Signalwege relevant ist.

DOCK 7 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Dock7-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

DOCK 7 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Dock7-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen DOCK 7-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Dock7-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.