Plasmide Double Nickase (h) DOCK 180: sc-401387-NIC

DOCK1 code pour DOCK180, un facteur d’échange de nucléotides guanyliques atypique qui active les GTPases de la famille Rac afin de coordonner le remodelage du cytosquelette d’actine. Par ses interactions avec des protéines adaptatrices telles qu’ELMO, DOCK180 régule l’adhésion dépendante des intégrines, la formation de lamellipodes, la phagocytose et la migration cellulaire dirigée, en intégrant des signaux provenant des récepteurs à activité tyrosine kinase et des voies des chimiokines. Cet axe de signalisation soutient des processus tels que le trafic des cellules immunitaires et la dynamique épithéliale, et une dérégulation de la signalisation Rac dépendante de DOCK1 a été associée à un comportement invasif et à une modification du potentiel métastatique dans de multiples contextes cancéreux. L’activité de DOCK1 est également étudiée dans des contextes inflammatoires et neurodéveloppementaux, où le contrôle du cytosquelette et le mouvement cellulaire sont au cœur du phénotype.

DOCK 180 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DOCK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DOCK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DOCK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DOCK1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.