Plasmide CRISPR d'Activation (h) DOCK 180: sc-401387-ACT

DOCK1 humain (DOCK180) est un facteur d’échange de nucléotides guanyliques atypique qui active les GTPases de la famille Rac afin de coordonner le remodelage du cytosquelette d’actine, l’adhésion cellulaire et la migration dirigée. Via des nœuds de signalisation en aval des intégrines, des récepteurs à activité tyrosine kinase et des récepteurs de chimiokines, DOCK180 soutient des processus tels que la formation de lamellipodes, la macropinocytose et l’engloutissement de cellules apoptotiques. La signalisation Rac dépendante de DOCK1 s’interface avec des voies qui régulent les transitions épithélio-mésenchymateuses, des programmes de motilité associés à l’invasion et le trafic des cellules immunitaires innées. Une activité ou une expression dérégulée de DOCK1 a été associée à des phénotypes inflammatoires et à des comportements favorisant la dissémination des cellules tumorales, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques en biologie du cancer et en immunologie.

DOCK 180 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DOCK1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DOCK 180 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DOCK1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DOCK1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DOCK 180. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DOCK1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DOCK 180 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DOCK 180 dans les cellules tumorales présentant une expression de DOCK1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.