DOCK 11 Lentiviral Activation Particles (h): sc-406204-LAC

DOCK11 kodiert den „Dedicator of Cytokinesis 11“, einen Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor, der Rho-Familien-GTPasen – insbesondere CDC42 – aktiviert und so den Umbau des Aktin-Zytoskeletts, die Zellpolarität und die gerichtete Migration koordiniert. Über seine DHR-1- und DHR-2-Domänen verknüpft DOCK11 die Phosphoinositid-Signalgebung mit der Aktivierung von GTPasen und beeinflusst dadurch Adhäsionsdynamik, das Trafficking von Immunzellen sowie rezeptorvermittelte Signalausgänge. Veränderte DOCK11-Aktivität wurde in Zusammenhängen mit dysregulierter Leukozytenfunktion und aberranter Kontrolle des Zytoskeletts untersucht, was es für Studien zur Immun-Signalgebung, Zellmotilität und zu Membran-Trafficking-Programmen relevant macht. Als Knotenpunkt-Regulator von Signalwegen kleiner GTPasen wird DOCK11 häufig in mechanistischen Arbeiten untersucht, die die Organisation des Zytoskeletts mit signalabhängigen Phänotypen verknüpfen.

DOCK 11 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente DOCK11-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

DOCK 11 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der DOCK11-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen DOCK 11-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen DOCK11-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.