DOC4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406806

Übersicht

TENM4 kodiert das transmembrane Teneurin-Protein 4 (DOC4), ein großes Typ-II-Membranprotein, das an Zell-Zell-Kommunikation, Adhäsion und Leit-/Orientierungssignalen beteiligt ist, die die Gewebemusterbildung und die neuronale Verschaltung beeinflussen. Über Interaktionen, die durch seine extrazellulären Domänen und intrazellulären Signalmotive vermittelt werden, trägt DOC4 zur Organisation des Zytoskeletts, zum Neuritenauswachsen und zur Aufrechterhaltung der Zellpolarität bei. Eine veränderte TENM4-Expression oder Sequenzvariation wurde mit neurologischen Phänotypen in Verbindung gebracht und zudem in Studien zum Verhalten von Tumorzellen berichtet, was seine Relevanz für Migrations- und Invasionsprogramme unterstützt. Diese Eigenschaften machen TENM4 zu einem geeigneten Ziel, um Signalwege zu untersuchen, die Adhäsions-abhängige Signalübertragung mit Entwicklung und krankheitsassoziiertem zellulärem Remodeling verknüpfen.

Das DOC4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TENM4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TENM4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TENM4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DOC4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TENM4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DOC4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TENM4-Exone abzielen, die für die DOC4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TENM4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DOC4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DOC4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TENM4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DOC4 HDR-Plasmid (h) und DOC4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TENM4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TENM4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.