Dnmt3L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-424871

Übersicht

Dnmt3l kodiert Dnmt3L, einen katalytisch inaktiven Kofaktor, der die de-novo-DNA-Methyltransferasen DNMT3A und DNMT3B stimuliert, um während der Entwicklung DNA-Methylierungsmuster zu etablieren und aufrechtzuerhalten. In der Maus ist Dnmt3L von hoher Bedeutung für die epigenetische Programmierung der Keimbahn, wo es die Methylierung von Retrotransposons und Imprint-Kontrollregionen unterstützt und damit zur Genomstabilität sowie zur elternspezifischen Genregulation beiträgt. Über diese Funktionen ist Dnmt3L in epigenetische Regulationswege eingebunden, die den Chromatinzustand, transkriptionelle Stilllegung und die meiosenassoziierte Reprogrammierung koordinieren. Eine Fehlregulation DNMT3L-assoziierter Methylierungsprozesse wird mit Defekten im Imprinting, veränderter Transposon-Repression und einer umfassenderen Instabilität des Epigenoms in Verbindung gebracht, die Entwicklungsphänotypen und krankheitsrelevante epigenetische Zustände beeinflussen kann.

Das Dnmt3L CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Dnmt3l-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Dnmt3l-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Dnmt3l nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Dnmt3L-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Dnmt3l-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Dnmt3L-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Dnmt3l-Exone abzielen, die für die Dnmt3L-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Dnmt3l-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Dnmt3L CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Dnmt3L CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Dnmt3l-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Dnmt3L HDR-Plasmid (m) und Dnmt3L HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Dnmt3l-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Dnmt3l-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.