Dnmt3L Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403892-ACT

O gene humano **DNMT3L** codifica a Dnmt3L, um cofator semelhante a uma metiltransferase de DNA cataliticamente inativa, que se liga e estimula as metiltransferases de novo **DNMT3A** e **DNMT3B** para estabelecer padrões de metilação do DNA durante o desenvolvimento. Ao reconhecer caudas de histona H3 não metiladas e promover a atividade de metilação associada à cromatina, a Dnmt3L contribui para o silenciamento epigenético, o imprinting genômico e a repressão de transposons. A regulação ligada a DNMT3L interage com vias de remodelamento de cromatina e de controle transcricional que moldam decisões de destino celular. A desregulação da maquinaria de metilação de novo e estados epigenéticos alterados dependentes de DNMT3L são frequentemente estudados no contexto de silenciamento gênico aberrante e instabilidade genômica relevantes para o câncer e para a epigenética do desenvolvimento.

Dnmt3L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DNMT3L sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Dnmt3L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DNMT3L em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DNMT3L, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Dnmt3L. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DNMT3L nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Dnmt3L no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Dnmt3L em células tumorais com expressão de DNMT3L silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.