Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Dnmt1 Double Nickase Plasmid (m): sc-420033-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Dnmt1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Dnmt1 Double-Nickase-Plasmid (m) und Dnmt1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Dnmt1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Dnmt1: sc-271729
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Dnmt1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-420033-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Dnmt1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-420033-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen *Dnmt1* kodiert die DNA-(Cytosin-5)-Methyltransferase 1, die wichtigste Erhaltungs-Methyltransferase, die während der S-Phase CpG-Methylierungsmuster auf neu synthetisierte DNA kopiert. DNMT1 koordiniert sich mit UHRF1, PCNA und chromatinassoziierten Faktoren, um epigenetische Information zu bewahren, und prägt so Transkriptionsprogramme, genomisches Imprinting und die X-Chromosomen-Inaktivierung. Durch die Stabilisierung der Methylierung an repetitiven Elementen trägt DNMT1 zur Stilllegung von Transposons und zur Genomintegrität bei und verknüpft seine Aktivität mit DNA-Replikation, Chromatinorganisation und DNA-Schadensantworten. Eine fehlregulierte, DNMT1-abhängige Methylierung wird breit mit veränderten Genexpressionszuständen bei Krebs sowie mit epigenetischen und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Modellsystemen in Verbindung gebracht, was DNMT1 zu einem häufigen Ziel mechanistischer Studien zur Aufrechterhaltung des Epigenoms macht.
Dnmt1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Dnmt1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Dnmt1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Dnmt1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Dnmt1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.