Dnmt1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400272-NIC

DNMT1 kodiert die DNA-(Cytosin-5)-Methyltransferase 1 (Dnmt1), die wichtigste Erhaltungs-Methyltransferase, welche CpG-Methylierungsmuster während der DNA-Replikation kopiert und so zur Bewahrung der epigenetischen Zellidentität beiträgt. Dnmt1 wirkt im Rahmen der replikationsgekoppelten Chromatinregulation und interagiert mit Faktoren wie UHRF1 und PCNA, um hemimethylierte DNA gezielt zu erkennen und die Methylierung mit der Nukleosomendynamik zu koordinieren. Über die Regulation von genomischem Imprinting, der Inaktivierung des X-Chromosoms und der Stilllegung von Transposons beeinflusst DNMT1 die Genomstabilität, die Spezifizierung von Zelllinien sowie transkriptionelle Programme. Eine fehlregulierte DNMT1-Aktivität und veränderte DNA-Methylierungslandschaften stehen in breitem Zusammenhang mit aberranter Genstilllegung und Chromatinzuständen, wie sie in verschiedensten Krebserkrankungen sowie in neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Kontexten beobachtet werden.

Dnmt1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DNMT1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DNMT1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DNMT1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DNMT1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.