DNCLI1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-412128

Übersicht

DYNC1LI1 kodiert die zytoplasmatische Dynein-1-Leicht-Intermediate-Kette 1 (DNCLI1), eine zentrale Untereinheit des zytoplasmatischen Dynein-1-Motorkomplexes, der den zum Minusende gerichteten Transport entlang von Mikrotubuli antreibt. DNCLI1 trägt zur Frachtbindung und zur Regulation des Motors bei und unterstützt Prozesse wie den Transport von Vesikeln und Organellen, die Positionierung des Endosomen‑Lysosomen-Systems, die Organisation des Golgi-Apparats sowie den retrograden axonalen Transport. Über diese Funktionen beeinflusst DYNC1LI1 die Zellpolarität, die Dynamik des mitotischen Spindelapparats und die neuronale Homöostase und verknüpft Defekte im dyneinabhängigen Transport mit Mechanismen neuroentwicklungsbedingter und neurodegenerativer Erkrankungen. Eine veränderte Funktion des Dynein-Komplexes ist zudem für Signalwege relevant, die Stressantworten und intrazelluläre Signalübertragung steuern und von einer präzisen Lokalisation der Fracht abhängen.

Das DNCLI1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DYNC1LI1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DYNC1LI1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DYNC1LI1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DNCLI1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DYNC1LI1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DNCLI1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DYNC1LI1-Exone abzielen, die für die DNCLI1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DYNC1LI1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DNCLI1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DNCLI1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DYNC1LI1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DNCLI1 HDR-Plasmid (h) und DNCLI1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DYNC1LI1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DYNC1LI1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.