DnaJC3 Lentiviral Activation Particles (h): sc-405100-LAC

DNAJC3 kodiert das im endoplasmatischen Retikulum (ER) lokalisierte Co-Chaperon DnaJC3 (auch als p58IPK bekannt), ein Mitglied der Hsp40/DnaJ-Familie, das während ER-Stress die Proteinhomöostase reguliert. DnaJC3 ist an der „unfolded protein response“ (UPR) beteiligt und dämpft stressassoziierte Signalwege, indem es mit PERK/EIF2AK3 und weiteren Regulatoren der Translation sowie der Chaperon-Aktivität interagiert. Dadurch beeinflusst es die Proteostase, den ER-assoziierten Abbau (ERAD) und die zelluläre Anpassung an fehlgefaltete Proteine. Eine veränderte DNAJC3-Funktion wurde mit dysregulierter Stresssignalgebung und einer erhöhten Anfälligkeit für proteotoxischen Stress in Verbindung gebracht; genetische und mechanistische Studien berichten dabei über Bezüge zu metabolischen und neurodegenerativen Phänotypen. Diese Eigenschaften machen DNAJC3 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um ER-Stress-Schaltkreise, Translationskontrolle sowie die Wechselwirkungen zwischen UPR-Signalgebung und entzündlichen Signalwegen in humanen Zellmodellen zu untersuchen.

DnaJC3 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente DNAJC3-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

DnaJC3 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der DNAJC3-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen DnaJC3-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen DNAJC3-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.