DnaJC3 Double Nickase Plasmid (m): sc-437172-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DnaJC3 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DnaJC3 Double-Nickase-Plasmid (m) und DnaJC3 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Dnajc3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DnaJC3 Double Nickase Plasmid (m) | sc-437172-NIC | 20 µg | $410.00 |
Dnajc3 kodiert DnaJC3, einen mit dem endoplasmatischen Retikulum assoziierten Co-Chaperon (auch als P58IPK bekannt), der zur Aufrechterhaltung der Proteostase während der Signalgebung der Unfolded-Protein-Response (UPR) beiträgt. DnaJC3 moduliert stressresponsive Signalwege, indem es mit Chaperonen der Hsp70-Familie interagiert und den PERK–eIF2α-Arm des ER-Stresses reguliert, wodurch es die Translationskontrolle und die Anpassung an proteotoxische Bedingungen beeinflusst. Aufgrund seiner Funktionen in der ER-Qualitätskontrolle und der Abschwächung der Stresskinase-Signalgebung ist DnaJC3 für die Forschung zur Funktion sekretorischer Zellen, zu Entzündungsprozessen und zu metabolischem Stress relevant. Eine veränderte ER-Stressbewältigung in Verbindung mit der Aktivität von DnaJC3 wird häufig in Kontexten wie der Homöostase pankreatischer β-Zellen, proteostatischen Dysbalancen bei neurodegenerativen Erkrankungen sowie allgemeineren Stressantwort-Phänotypen in Mausmodellen untersucht.
DnaJC3 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Dnajc3-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Dnajc3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Dnajc3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Dnajc3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.