DnaJC12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-412707

Übersicht

DNAJC12 kodiert DnaJC12, ein J-Domänen-Co-Chaperon, das mit der HSP70-Maschinerie zusammenarbeitet, um die Proteinfaltung und die Proteostase im Zytosol und im endoplasmatischen Retikulum zu regulieren. Durch die Stimulierung der ATPase-Aktivität von HSP70 unterstützt DnaJC12 die Reifung und Stabilität von Zielproteinen und hilft, zelluläre Antworten auf proteotoxischen Stress zu koordinieren. Dieses Chaperon-Netzwerk ist mit dem Ubiquitin-Proteasom-System sowie ER-assoziierten Abbauwegen (ERAD) verknüpft, um die Qualitätskontrolle von Proteinen aufrechtzuerhalten. Eine veränderte DNAJC12-Funktion wurde mit einer gestörten Enzymhomöostase und neuro-metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was sie für die Untersuchung von Stressanpassung und Proteinreifungswegen in menschlichen Zellen relevant macht.

Das DnaJC12 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DNAJC12-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DNAJC12-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DNAJC12 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DnaJC12-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DNAJC12-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DnaJC12-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DNAJC12-Exone abzielen, die für die DnaJC12-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DNAJC12-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DnaJC12 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DnaJC12 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DNAJC12-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DnaJC12 HDR-Plasmid (h) und DnaJC12 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DNAJC12-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DNAJC12-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.