Plásmido CRISPR de Activación (h) DNA pol ν: sc-406518-ACT

POLN codifica la ADN polimerasa ν (ADN pol ν), una polimerasa de la familia A implicada en la tolerancia al daño del ADN y el mantenimiento del genoma mediante la síntesis de ADN por translesión y pasos relacionados de síntesis de ADN asociados a la reparación. La actividad de la ADN pol ν se ha vinculado al procesamiento de lesiones que detienen a las polimerasas replicativas, influyendo así en la progresión de la horquilla de replicación y en el equilibrio entre resultados de reparación del ADN propensos a errores y libres de errores. Como parte de vías más amplias de reparación del ADN y de respuesta al estrés replicativo, POLN contribuye a mantener la estabilidad cromosómica bajo estrés genotóxico. La desregulación de la expresión o la función de POLN se ha asociado con fenotipos de mutagénesis e inestabilidad genómica relevantes para estudios mecanísticos de defectos de reparación del ADN asociados al cáncer.

DNA pol ν El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de POLN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DNA pol ν El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus POLN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional POLN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DNA pol ν. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo POLN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DNA pol ν en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DNA pol ν en células tumorales con expresión de POLN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.