DNA pol γ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422341

Übersicht

Polg kodiert die DNA‑Polymerase Gamma, die wichtigste replizierende Polymerase der mitochondrialen DNA in Mauszellen, und ist für die Replikation und Reparatur der mtDNA sowie für die Aufrechterhaltung der Integrität des mitochondrialen Genoms erforderlich. Die DNA‑Polymerase γ wirkt im Zusammenspiel mit Komponenten des mitochondrialen Nukleoids und der Basenexzisionsreparatur, um die oxidative Phosphorylierung zu unterstützen, indem sie Kopienzahl und Genauigkeit der mtDNA bewahrt. Eine Störung von Polg beeinträchtigt die mitochondriale Biogenese, erhöht die mtDNA‑Mutationslast und kann eine metabolische Umprogrammierung sowie Stresssignalwege auslösen, die mit einer veränderten Redox‑Homöostase verknüpft sind. Polg wird in Zusammenhängen mitochondrialer Dysfunktion umfassend untersucht, darunter Neurodegeneration, Myopathien und altersassoziierte Phänotypen, die durch eine beeinträchtigte Stabilität des mitochondrialen Genoms bedingt sind.

Das DNA pol γ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Polg-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Polg-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Polg nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DNA pol γ-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Polg-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DNA pol γ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Polg-Exone abzielen, die für die DNA pol γ-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Polg-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DNA pol γ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom DNA pol γ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Polg-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DNA pol γ HDR-Plasmid (m) und DNA pol γ HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Polg-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Polg-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.