DNA pol γ2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407382

Übersicht

POLG2 kodiert die Untereinheit 2 der DNA-Polymerase gamma, einen akzessorischen Faktor, der an die katalytische POLG-Untereinheit bindet, um die Prozessivität zu erhöhen und eine hochfidele Replikation und Reparatur der mitochondrialen DNA (mtDNA) zu unterstützen. Dieses Protein wirkt im Kontext der mitochondrialen Nukleoid-Biologie und ist entscheidend für die Aufrechterhaltung der mtDNA-Kopienzahl, der Genomintegrität und der Kapazität der oxidativen Phosphorylierung. Eine Störung der POLG2-abhängigen Replikationsdynamik kann zu mtDNA-Depletion oder zur Anhäufung von Deletionen beitragen und damit mitochondriale Genominstabilität mit neuromuskulären und multisystemischen Phänotypen mitochondrialer Erkrankungen verknüpfen. POLG2 wird daher intensiv in Signalwegen untersucht, die die mitochondriale Biogenese, Antworten auf Replikationsstress und stoffwechselgetriebene Signalübertragung steuern.

Das DNA pol γ2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des POLG2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des POLG2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von POLG2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DNA pol γ2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von POLG2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DNA pol γ2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf POLG2-Exone abzielen, die für die DNA pol γ2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere POLG2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DNA pol γ2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DNA pol γ2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des POLG2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DNA pol γ2 HDR-Plasmid (h) und DNA pol γ2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von POLG2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten POLG2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.