Particules Lentivirales d'Activation (h) DNA Ligase I: sc-402830-LAC

Le gène humain LIG1 code la ligase I de l’ADN, une ligase ATP‑dépendante qui colmate les brèches (nicks) de l’ADN en catalysant la formation de liaisons phosphodiester lors de la réplication de l’ADN sur le brin retardé, de la maturation des fragments d’Okazaki et de la réparation par excision de base à longue plage. La ligase I de l’ADN agit à la fourche de réplication et au sein des réseaux de réponse aux dommages de l’ADN, en coordination avec PCNA, RFC, FEN1 et les polymérases, contribuant ainsi à la stabilité du génome et à une progression fidèle du cycle cellulaire. Toute perturbation de l’activité ou de l’expression de LIG1 est associée à une augmentation du stress réplicatif, à l’accumulation de cassures de brin et à une charge mutationnelle accrue pouvant influencer l’oncogenèse et d’autres phénotypes d’instabilité génomique. En tant que facteur central de la réparation couplée à la réplication, LIG1 est fréquemment étudié dans les voies qui régissent les points de contrôle de la phase S, le maintien de la chromatine et les réponses aux dommages oxydatifs ou par alkylation.

Les particules d'activation lentivirales DNA Ligase I (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de LIG1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales DNA Ligase I (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription LIG1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de DNA Ligase I. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif LIG1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.