DMRT1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402856-ACT

DMRT1（doublesex and mab-3 related transcription factor 1）は、亜鉛フィンガー型のDNA結合転写因子をコードしており、ヒトの性腺の発生と維持、ならびに雄性生殖細胞の運命維持において中心的な役割を担います。DMRT1は、性決定、セルトリ細胞の分化、精祖細胞の増殖・分化を制御する転写プログラムを調節し、SOX9やレチノイン酸応答性経路を含むより広範なネットワークと統合的に機能します。DMRT1の発現量（ドサージ）や制御の異常は、性分化疾患、造精機能障害、性腺形成不全と関連することが報告されており、生殖生物学の機序解明研究における重要な標的となっています。さらに、DMRT1活性の異常は一部の腫瘍においても報告されており、疾患関連モデルでの系譜（ラインage）規定や転写制御の研究に利用できることが示唆されています。

DMRT1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DMRT1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DMRT1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DMRT1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDMRT1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DMRT1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDMRT1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDMRT1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDMRT1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDMRT1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。