Plasmide Double Nickase (h) DMP-1: sc-402197-NIC

DMP1 code la phosphoprotéine acide de la matrice dentinaire 1 (DMP‑1), une phosphoprotéine de la matrice extracellulaire appartenant à la famille SIBLING, qui est maturée par clivage protéolytique et contribue à la formation des tissus minéralisés. DMP‑1 régule la maturation des ostéocytes et l’homéostasie du phosphate, et s’inscrit dans des programmes de biomineralisation qui coordonnent l’organisation de la matrice collagénique avec le dépôt d’hydroxyapatite. En biologie osseuse et dentaire, DMP‑1 influence des réseaux de signalisation liés au remodelage de la matrice extracellulaire, aux interactions cellule–matrice associées aux intégrines et à la gestion des ions minéraux. Des altérations de la fonction ou de l’expression de DMP1 sont associées à des phénotypes héréditaires de rachitisme/ostéomalacie hypophosphatémiques ainsi qu’à d’autres troubles de la minéralisation de la dentine et de l’os, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la biologie de la matrice squelettique.

DMP-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DMP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DMP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DMP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DMP1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.