Plásmido CRISPR de Activación (h) DMBT1: sc-402615-ACT

DMBT1 (deleted in malignant brain tumors 1) codifica una glicoproteína secretada rica en cisteínas del tipo “scavenger receptor”, implicada en la diferenciación epitelial y en la inmunidad innata de las mucosas. La proteína participa en las interacciones huésped–microbio al unirse a ligandos asociados a patógenos y contribuye al mantenimiento de la barrera mediante funciones en la organización de la matriz extracelular y la regulación de la inflamación. La expresión de DMBT1 se modula durante el daño tisular y la reparación, y se ha asociado con programas de remodelado epitelial. Se han descrito alteraciones en la regulación de DMBT1 en múltiples tipos de cáncer y en afecciones inflamatorias, lo que respalda su uso como punto de entrada molecular para estudiar la comunicación cruzada entre el tumor y el microambiente, así como las vías de defensa mucosal.

DMBT1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DMBT1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DMBT1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DMBT1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DMBT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DMBT1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DMBT1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DMBT1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DMBT1 en células tumorales con expresión de DMBT1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.